La prueba de endotoxinas bacterianas generalmente implica el uso de reactivos que, cuando se mezclan en una solución con un posible contaminante, provocan una reacción, lo que significa la presencia de una endotoxina. Las pruebas cromogénicas, la prueba de coágulos en gel y las pruebas turbidimétricas son los métodos que los científicos emplean comúnmente para las pruebas de endotoxinas bacterianas. Los técnicos utilizan estos métodos de evaluación en una variedad de sustancias y objetos al verificar la contaminación por endotoxinas. El agua, las materias primas utilizadas en la fabricación de medicamentos, equipos y envases deben pasar todos los estándares de endotoxinas.
Las bacterias, los hongos y los virus tienen membranas exteriores protectoras que consisten en lipopolisacáridos, también conocidos como LPS. La porción lipídica de estas cadenas contiene endotoxinas. Estas sustancias generalmente permanecen dentro de la membrana, pero se liberan durante el proceso de división celular y durante la destrucción o lisis celular. En los seres humanos, estas sustancias causan fiebre, coagulación anormal, choque séptico y otros síntomas, aunque a diferencia de las exotoxinas dentro de la célula, las endotoxinas no se convierten en toxoide. Generalmente, los microbiólogos verifican la presencia de endotoxinas asociadas con varias bacterias gramnegativas, incluida la E. coli.
La prueba de coagulación en gel, o ensayo de lisado de ameboecitos de Limulus (LAL), implica el uso de una sustancia química que destruye la membrana derivada de los amebocitos del cangrejo herradura, también conocido como Limulus polyphemus. Los técnicos observan una indicación positiva de endotoxinas si se produce coagulación o gelificación cuando el lisado se expone al objeto o sustancia en cuestión. Los microbiólogos suelen utilizar este método de prueba de endotoxinas bacterianas junto con pruebas cromogénicas y turbidimétricas para obtener resultados concluyentes.
Las pruebas de endotoxinas bacterianas cromogénicas utilizan un LAL especialmente tratado. Cuando este lisado entra en contacto con una endotoxina, la reacción produce un color específico. El proceso de prueba final incluye medir la turbidez o nubosidad de la solución. Los técnicos exponen la solución formada en la prueba de coágulo de gel a un espectrofotómetro, que emite un haz de luz. Al medir la pérdida de intensidad de la luz en el haz a medida que atraviesa la solución, los microbiólogos pueden determinar si hay o no una endotoxina presente.
Los asociados de laboratorio generalmente completan estas tres pruebas de endotoxinas bacterianas dos o tres veces para garantizar resultados precisos. La prueba de gel no se utiliza exclusivamente, ya que su límite más bajo de detección es de 0.03 unidades de Ehrlich por mililitro (UE / ml). Las pruebas cromogénicas y turbidimétricas detectan endotoxinas en el rango de 0.005 UE / ml. Los parámetros de seguridad difieren mucho según la sustancia que se esté probando. Mientras que el agua estéril utilizada para inyección o irrigación no puede contener más de 0.25 UE / ml, el agua estéril para inhalación puede contener hasta 0.5 UE / ml.