Das ELISA-Verfahren beginnt in der Klinik, indem dem Patienten eine Blutprobe entnommen wird. Anschließend werden mehrere Schritte mit dem ELISA-Testkit im Labor durchgeführt. Der Test erkennt das Vorhandensein von Antikörpern oder Antigenen gegen eine Krankheit wie HIV im Blut. Die Schritte umfassen die Zugabe verschiedener Substanzen und das Waschen und die Ergebnisse werden im Allgemeinen durch einen Farbwechsel gemessen.
Als diagnostischer Test wird der Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), der auch als Enzymimmunoassay (EIA) bezeichnet wird, eingesetzt. Es ist am bekanntesten als diagnostischer Test für HIV. Die Testplatte besteht normalerweise aus 96 kleinen Wells, in die ein spezifisches Antigen immobilisiert wird. Wenn der Antikörper in der Serumprobe vorhanden ist, bindet er an das Antigen und ermöglicht den Nachweis über die verschiedenen Schritte des ELISA-Verfahrens.
Der erste Schritt im ELISA-Verfahren ist die Entnahme einer Probe vom Patienten. Dies wird von einer Krankenschwester unter sterilen Bedingungen durchgeführt. Das Blut wird in der Regel aus einer Arm- oder Handvene entnommen. Am Arm wird ein Tourniquet angelegt, um die Vene anzuschwellen und den Eingriff zu erleichtern, und die Haut wird dort gereinigt, wo die Nadel eingeführt wird. Beim Einstechen der Nadel ist möglicherweise ein kleiner Stich zu spüren und das Blut wird in einem sterilen Röhrchen gesammelt.
Nachdem die Blutprobe entnommen wurde, wird sie ins Labor überführt, wo der Rest des ELISA-Verfahrens von einem Labortechniker durchgeführt wird. Die Blutprobe wird zunächst in die Wells der ELISA-Platte gegeben. Wenn der spezifische Antikörper vorhanden ist, bindet er an das Antigen. Die Platte wird dann unter Verwendung eines Puffers gewaschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Ein zweiter Antikörper, normalerweise tierischen Ursprungs, an den ein Enzym gebunden ist, wird dann hinzugefügt, das an den Antikörper-Antigen-Komplex bindet. Die Platte wird erneut gewaschen, um Überschüsse zu entfernen. Das Enzym ist farbreaktiv, wenn am Ende des ELISA-Verfahrens ein Substrat zugegeben wird. Es ist die Messung des Grades der Farbänderung, die das Ergebnis liefert.
Das ELISA-Verfahren muss sorgfältig befolgt werden, um falsche Ergebnisse zu vermeiden. In den meisten ELISA-Platten ist eine Positiv- und eine Negativkontrolle enthalten, um solche falschen Ergebnisse zu minimieren. Bei einem HIV-Test wird auf ein positives Ergebnis normalerweise ein zweiter, bestätigender Test, oft von einem anderen Typ, wie beispielsweise ein Western Blot, nachverfolgt.