O que é detecção de ELISA?

Um ensaio imunoenzimático (ELISA) é um teste realizado em um laboratório de imunologia para determinar os níveis de proteína em uma amostra biológica. A detecção de ELISA refere-se à etapa final do teste em que uma solução límpida, ou substrato, é adicionada a uma placa de plástico contendo anticorpo marcado com enzima ligada. A enzima cliva o substrato e ocorre uma mudança de cor. A absorbância de luz da solução colorida final é então medida em um leitor de placas ELISA ou espectrofotômetro.

Existem vários tipos de testes ELISA, sendo os dois mais comuns o ELISA indireto e o ELISA de captura, ou sanduíche. O ELISA indireto é usado para detectar uma proteína, conhecida como anticorpo, no soro de um paciente. Um exemplo de teste ELISA indireto é o teste do vírus da imunodeficiência humana (HIV) usado para detectar anticorpos contra o HIV. O teste ELISA sanduíche detecta uma proteína, ou antígeno, capturando-o entre dois anticorpos. A detecção do hormônio gonadotrofina coriônica humana (hCG), que é elevada durante a gravidez, é feita com um teste ELISA sanduíche.

Ambos os testes têm uma etapa de detecção de ELISA no final do ensaio. Esta etapa envolve a adição de um anticorpo que possui uma molécula de enzima ligada a ele. Após a adição do anticorpo marcado com enzima, é adicionada uma solução incolor, contendo a molécula de substrato específica para aquela enzima. A enzima cliva a molécula do substrato e a solução muda de cor dependendo da combinação usada. A determinação da quantidade de anticorpo ou antígeno na amostra do paciente é feita medindo a intensidade da mudança de cor.

Existem várias combinações de substrato de enzima disponíveis para uso na etapa de detecção de ELISA. A enzima mais comum é a peroxidase de rábano (HRP), que pode clivar as moléculas substrato dicloridrato de orto-fenilenodiamina (OPD) e tetrametilbenzidina (TMB), entre outras. A clivagem de OPD e TMB resulta em uma cor amarela e a densidade óptica ou absorvância da luz desses substratos é medida por um leitor de placa ELISA. A absorbância de luz do OPD é medida em um comprimento de onda de 490 nanômetros (nm), enquanto o TMB é medido a 450 nm.

Outra enzima comum usada na etapa de detecção de ELISA é a fosfatase alcalina. Esta enzima é usada com o substrato p-nitrofenil fosfato (PNPP) e também produz uma solução amarela. PNPP absorve luz em um comprimento de onda de 405 nm.

A seleção das combinações de substrato de enzima geralmente é baseada em quais anticorpos marcados com enzima estão disponíveis comercialmente, bem como em qual equipamento será usado para medir a absorbância de luz. As muitas combinações disponíveis para detecção ELISA tornam o teste ELISA altamente versátil. É uma ferramenta importante em laboratórios de pesquisa e testes de doenças.