Un anticorpo immunoistochimico (IHC) è un reagente comunemente utilizzato negli studi scientifici per contrassegnare gli antigeni di interesse. Un antigene è una qualsiasi piccola molecola che può causare una reazione immunitaria che forza la produzione di anticorpi contro quel singolo antigene. Basato sul sistema immunitario dei mammiferi, la produzione di anticorpi è un singolo passaggio in un processo di identificazione del materiale come estraneo in modo che il corpo possa quindi attaccare ed espellere la sostanza invasiva, che si tratti di un virus, un’infezione batterica o una piccola molecola come il polline.
Gli anticorpi possono avere un’enorme specificità e capacità di legame nel marcare gli antigeni. Tale specificità viene sfruttata a vantaggio degli scienziati quando la produzione di anticorpi è orientata all’identificazione di antigeni specifici di interesse. Una sottile sezione di tessuto può essere colorata con un anticorpo in modo che lo sperimentatore possa facilmente identificare tutti i siti antigenici presenti in quel campione. Molte aziende sono specializzate nella creazione di anticorpi, mettendo a disposizione di scienziati e sperimentatori un vasto catalogo collettivo di anticorpi.
Un anticorpo IHC viene utilizzato in diverse tecniche sperimentali. La colorazione degli anticorpi in sezioni sottili di tessuto incluse in paraffina o plastica viene spesso utilizzata in modo che gli antigeni possano essere trovati in situ. Un anticorpo IHC può essere utilizzato anche in tecniche di precipitazione sperimentali come un’analisi di co-immunoprecipitazione, concentrandosi sul portare gli antigeni fuori dalla soluzione per quantificare la quantità di antigene presente in un grande pezzo di tessuto. I saggi che misurano la quantità di luce che è in grado di passare bene attraverso una piastra di coltura tissutale dopo che un surnatante è stato esposto al fondo di un anticorpo IHC ben pre-rivestito sono spesso utilizzati per quantificare la quantità di un antigene in un omogeneizzato campione di tessuto.
È possibile disporre di protocolli di colorazione degli anticorpi che si basano sull’uso di un singolo anticorpo per il rilevamento dell’antigene. Questi protocolli vengono solitamente utilizzati su campioni di tessuto incorporati in un substrato non reattivo e montati su un vetrino. Queste procedure di colorazione a singolo anticorpo sono popolari anche nei laboratori che etichettano i propri anticorpi con molecole di rilevamento come i fluorofori.
Più comunemente, tuttavia, i protocolli di colorazione degli anticorpi richiedono l’uso di anticorpi primari e secondari. Un anticorpo IHC primario viene sollevato contro un antigene specifico, che potrebbe essere studiato non comunemente. Un anticorpo IHC secondario sarà allevato contro l’anticorpo IHC primario. L’anticorpo secondario sarà tuttavia marcato con una molecola identificativa come la biotina o un fluoroforo. Questa tecnica a due anticorpi è comune perché le aziende risparmiano denaro aggiungendo fluorofori o costosi reagenti di marcatura a grandi quantità di anticorpi generati contro i marcatori immunitari di una certa specie piuttosto che etichettare reagenti costosi a un anticorpo sollevato contro un antigene che potrebbe essere studiato da pochissimi scienziati.