Western-Blot-Antikörper sind große Y-förmige Proteine oder Immunglobuline, die zur Verwendung im Western-Blot-Immunoassay hergestellt werden, einem Test zum Nachweis eines assoziierten Proteins in einer Gewebekultur. Viele Unternehmen sind auf die Herstellung und Bereitstellung von Antikörpern für Labore spezialisiert, die die Western-Blot-Methode verwenden. Es gibt zwei Arten von Western-Blot-Antikörpern, die im Labor hergestellt werden können: monoklonal und byklonal. Das Verfahren und die Art des hergestellten Antikörpers hängen davon ab, wie sich der Antikörper auf natürliche Weise im Wirtskörper reproduziert. Während des Western-Blot-Tests wird ein Verfahren namens Gelelektrophorese verwendet, um Proteine, die in der Gewebeprobe nativ sind, von gezielten Western-Blot-Antikörpern zu trennen, was zu einer positiven Identifizierung führt.
Fast jede Substanz kann verwendet werden, um einen monoklonalen Antikörper herzustellen, der in einer Western-Blot-Kultur an sein verwandtes Protein bindet. Polyklonale Antikörper werden in ähnlicher Weise hergestellt, aber der Prozess ist insofern komplizierter, als die Antikörper aus Immun-B-Zell-Ressourcen geerntet werden müssen, anstatt einfach aus einer Elternzelle geklont zu werden. Die wachsende Technologie zur Herstellung von Immunglobulinen aus verschiedenen Substanzen gilt als unschätzbares Werkzeug in der Biochemie, Molekularbiologie und Medizin. Western-Blot-Analysen können die mit HIV, Lyme-Borreliose und der Creutzfeldt-Jakob-Krankheit – Mad Cow Disease – assoziierten Proteine erkennen, was dazu führt, dass Ärzte früher im Krankheitsverlauf eine definitive Diagnose stellen können. Neben diesen Anwendungen kann die Forensik auch die Western-Blot-Antikörpertechnologie verwenden, um Blut- oder andere Substanzproben an einem Tatort zu identifizieren.
Unabhängig von seiner Anwendung beginnt der Prozess der Identifizierung eines Zielproteins in einer Gewebeprobe mit der Reproduktion einer Menge des Antikörpers aus einer bekannten Quelle. Monoklonale Antikörper können aus einer bestehenden Kultur hergestellt werden, jedoch ist das Verfahren zur Herstellung polyklonaler Antikörper wesentlich zeitaufwendiger. Das Verfahren beinhaltet typischerweise das Injizieren eines Wirtstiers, wie einer Maus oder einer Ziege, mit entweder inaktiven oder lebenden Partikeln, wobei an diesem Punkt die B-Lymphozyten des Tieres Immunglobuline produzieren, die für das Antigen spezifisch sind. Als nächstes werden der Probe Detergenzien und Puffer zugesetzt, die die Verdauung der Immunglobuline durch native Enzyme verhindern, und die Gelelektrophorese wird verwendet, um die Proteine nach Molekulargewicht oder isoelektrischer Ladung zu trennen. Die Western-Blot-Antikörper sind nun bereit für den „Blotting“-Prozess, bei dem es sich um den Transfer der Antikörper auf eine Membran handelt, wobei die spezifischen Blot-Muster, die während des Transfers erzeugt werden und für das identifizierte Protein einzigartig sind, beachtet werden.