Eulen spielen eine wichtige Rolle in der Mythologie vieler Kulturen auf der ganzen Welt. In der Mythologie können sie Begleiter der Götter sein, böse Geister, weise Beobachter oder die Verkörperung von Naturgewalten. In vielen Kulturen sind Eulen Boten des Todes oder werden anderweitig mit den Mächten der Unterwelt in Verbindung gebracht. Diese negative Konnotation ergibt sich aus der Tatsache, dass Eulen nachtaktiv sind; Nachtaktive Tiere spielen in Mythen und Folklore oft eine negative Rolle.
Die berühmtesten Eulen der Mythologie sind wahrscheinlich diejenigen, die mit Athena, der griechischen Göttin der Weisheit und des Krieges, der Schutzgottheit der Stadt Athen, in Verbindung gebracht werden. Künstler stellten Athena mit einer Eule auf einer Schulter dar. Eulen wurden möglicherweise aufgrund ihrer Fähigkeit, nachts gut zu sehen, und ihrer großen Augen mit der Göttin in Verbindung gebracht, was ihren Beinamen „helläugige Athene“ hervorrief. Als Ergebnis dieser Assoziation sind Eulen in der westlichen Welt weiterhin Symbole der Weisheit. Eine Eulengattung behält den Namen „Athene“.
Mythologien aus anderen Teilen der Welt geben Eulen oft eine unheimlichere Rolle. Obwohl die Römer viele Elemente der griechischen Religion übernahmen, enthielt die römische Folklore auch gefährliche eulenähnliche Kreaturen, die die Lebenskraft eines Säuglings aussaugen konnten. In ähnlicher Weise waren Eulen in der arabischen Mythologie Vögel des bösen Omen. Die Legende besagt, dass Eulen über die Gräber ermordeter Männer schrien, und ihren Eiern wurden übernatürliche Eigenschaften zugeschrieben. Ähnliche Überzeugungen gibt es oder gab es in Afrika südlich der Sahara, wo Eulen die Rolle von Vorboten des Todes oder Unglücksbringern spielen.
In Süd- und Mittelamerika werden Eulen wieder mit dem Tod und der Unterwelt in Verbindung gebracht. In der Maya-Mythologie wird Xibalba, „der Ort der Angst“, von zwei Todesgöttern regiert, Hun-Came („Ein Tod“) und Vucub-Came („Sieben Tod“). Ihre Boten sind vier Geister, die die Gestalt von Eulen annehmen. Ebenso erscheint der aztekische Gott Mictlantecuhtli, Gott der Toten, als Skelett mit einem Kopfschmuck aus Eulenfedern.
Die indianischen Nationen Nordamerikas hatten in ihrer Mythologie eine Vielzahl unterschiedlicher Rollen für Eulen. In einigen Kulturen spielte die Eule die Rolle eines Boten aus der Unterwelt, während sie in anderen, wie den Sioux, als Wächter den Eingang zum Jenseits beschützte. Die Passamaquoddy-Nation erzählte eine Geschichte, in der der Vogel ein hilfreicher Geist war, der den Menschen magische Gaben verschaffte.