L’amplificazione dell’RNA è un processo che richiede alcune copie di una sezione di acido ribonucleico (RNA) e crea migliaia di copie identiche nella composizione. Pezzi di RNA sono macromolecole, composte da stringhe di nucleotidi, quindi l’amplificazione è un processo in più fasi che prevede la riproduzione dell’esatta sequenza di nucleotidi da un pezzo di RNA. L’amplificazione dell’RNA è utile nella ricerca che coinvolge virus, il cui materiale genetico può essere immagazzinato come RNA di memoria (mRNA) anziché DNA; lo studio dell’espressione genica negli organismi; e la creazione di proteine ??dall’RNA trascrizionale (tRNA). Per amplificare l’RNA, viene creata e amplificata una sequenza complementare, quindi utilizzata come modello per la creazione di copie dell’RNA. Un intermediario del DNA è necessario per l’amplificazione dell’RNA perché l’RNA si presenta generalmente solo in una forma non accoppiata a singolo filamento, quindi un modello di DNA deve essere creato affinché l’enzima trascrittasi RNA funzioni; L’RNA non può essere trascritto da se stesso.
La sequenza di RNA di interesse deve essere prima isolata dal materiale contaminante prima che possa iniziare l’amplificazione dell’RNA. Al termine, la trascrittasi inversa dell’enzima viene aggiunta al modello di RNA. La trascrittasi inversa viene utilizzata per creare una sequenza di DNA cellulare (cDNA) di coppie di basi complementari all’mRNA originale. Questo primo filamento di cDNA può quindi essere utilizzato per creare secondi filamenti di cDNA che possono essere utilizzati nella reazione a catena della polimerasi, un processo che amplifica i filamenti di DNA attraverso cicli ripetuti di replicazione del DNA e successiva separazione dei due filamenti. Il cDNA di solito contiene primer o enzimi su un’estremità della sequenza del DNA, che fungono da segnali per il legame nucleotidico e, quindi, la produzione di filamenti di mRNA identici alla sequenza originale.
Esistono diversi metodi per l’amplificazione dell’RNA, ma il metodo che produce la maggior quantità di mRNA fedele alla copia originale è chiamato metodo di commutazione del modello. Questo metodo utilizza l’enzima trascrittasi inversa del virus della leucemia murina Moloney, che aggiunge una regione di primer alla fine del cDNA del primo filamento dopo aver creato questo filamento dal modello di RNA. Questa regione di primer viene aggiunta anche al secondo filamento di cDNA, da cui vengono eseguite copie amplificate di RNA. Un altro enzima, chiamato promotore, può essere legato alla regione di innesco sul secondo filamento di cDNA, che aumenta drasticamente la quantità di copie di RNA prodotte da questo filamento di cDNA attraverso la trascrizione.