Al contrario de lo que se podr?a pensar en un principio, un anticuerpo de biotina no es una sustancia que se produzca contra la biotina. M?s bien, un anticuerpo de biotina es un anticuerpo que se ha conjugado con biotina. La biotina se une fuertemente a un ligando, la avidina, que, a su vez, puede conjugarse con mol?culas detectables por luz como los fluor?foros. La biotina y la avidina forman uno de los enlaces covalentes biol?gicamente relevantes m?s fuertes conocidos, lo que hace que las unidades de ligando / receptor conjugadas con biotina y avidina sean especialmente ?tiles en estudios cient?ficos.
La biotina es una vitamina del complejo B, vitamina B7. Es una mol?cula tan peque?a que se pueden conjugar m?ltiples mol?culas de biotina a un ?nico anticuerpo monoclonal o policlonal. El hecho de que la biotina tambi?n sea soluble en agua permite una mayor versatilidad en los sistemas tamp?n que si fuera insoluble. Para una mayor especificidad, a menudo se recomienda la conjugaci?n de anticuerpos monoclonales a biotina en lugar de la conjugaci?n de anticuerpos policlonales. La mol?cula de biotina se puede unir directamente con el anticuerpo de inter?s o se puede unir a trav?s de una cola molecular para permitir una mayor libertad de movimiento.
El ligando de biotina avidina se encuentra en la alb?mina de huevo. Se puede fabricar de forma econ?mica y aislar f?cilmente. M?ltiples mol?culas de avidina se unir?n a cada receptor de biotina, amplificando una ?nica se?al de detecci?n de anticuerpos. Cuando un anticuerpo de biotina se adhiere a un ant?geno de inter?s, un experimentador puede entonces exponer el complejo a avidina conjugada con fluor?foros, haciendo que el complejo sea detectable. A trav?s de im?genes fluorescentes, el anticuerpo de biotina y el ligando conjugado con avidina pueden detectarse con microscop?a ?ptica, y los ant?genos de inter?s pueden estudiarse in situ.
Aunque la creaci?n y el uso de un anticuerpo de biotina y una mol?cula de avidina marcada con fluorescencia es una soluci?n com?n para la detecci?n de ant?genos, existen alternativas que todav?a hacen uso del complejo de biotina / avidina. La uni?n de biotina a un ligando como una neurotoxina puede ser ventajosa para detectar la ubicaci?n de los receptores neuronales afectados por la neurotoxina en cuesti?n. Tambi?n es posible conjugar biotina con una secuencia de nucle?tidos como el ?cido ribonucleico mensajero (ARNm) para encontrar d?nde se traducen estas secuencias de nucle?tidos en prote?nas o para detectar la regulaci?n del ARNm celular.
Es posible comprar anticuerpos monoclonales o policlonales biotinilados, aunque la producci?n de anticuerpos biotinilados est? dentro de la capacidad de muchos experimentadores. Se pueden encontrar protocolos en l?nea que sugieren m?todos de biotinilaci?n de anticuerpos, aunque los protocolos m?s f?ciles de seguir vinculan directamente la biotina a un anticuerpo en lugar de sugerir c?mo intercalar un espaciador molecular. Los espaciadores moleculares entre la biotina y su anticuerpo asociado permiten un mayor espaciamiento para exponer m?s mol?culas a los sitios de uni?n, y estos anticuerpos de biotina generalmente se compran en lugar de fabricarse.