Al contrario de lo que se podría pensar en un principio, un anticuerpo de biotina no es una sustancia que se produzca contra la biotina. Más bien, un anticuerpo de biotina es un anticuerpo que se ha conjugado con biotina. La biotina se une fuertemente a un ligando, la avidina, que, a su vez, puede conjugarse con moléculas detectables por luz como los fluoróforos. La biotina y la avidina forman uno de los enlaces covalentes biológicamente relevantes más fuertes conocidos, lo que hace que las unidades de ligando / receptor conjugadas con biotina y avidina sean especialmente útiles en estudios científicos.
La biotina es una vitamina del complejo B, vitamina B7. Es una molécula tan pequeña que se pueden conjugar múltiples moléculas de biotina a un único anticuerpo monoclonal o policlonal. El hecho de que la biotina también sea soluble en agua permite una mayor versatilidad en los sistemas tampón que si fuera insoluble. Para una mayor especificidad, a menudo se recomienda la conjugación de anticuerpos monoclonales a biotina en lugar de la conjugación de anticuerpos policlonales. La molécula de biotina se puede unir directamente con el anticuerpo de interés o se puede unir a través de una cola molecular para permitir una mayor libertad de movimiento.
El ligando de biotina avidina se encuentra en la albúmina de huevo. Se puede fabricar de forma económica y aislar fácilmente. Múltiples moléculas de avidina se unirán a cada receptor de biotina, amplificando una única señal de detección de anticuerpos. Cuando un anticuerpo de biotina se adhiere a un antígeno de interés, un experimentador puede entonces exponer el complejo a avidina conjugada con fluoróforos, haciendo que el complejo sea detectable. A través de imágenes fluorescentes, el anticuerpo de biotina y el ligando conjugado con avidina pueden detectarse con microscopía óptica, y los antígenos de interés pueden estudiarse in situ.
Aunque la creación y el uso de un anticuerpo de biotina y una molécula de avidina marcada con fluorescencia es una solución común para la detección de antígenos, existen alternativas que todavía hacen uso del complejo de biotina / avidina. La unión de biotina a un ligando como una neurotoxina puede ser ventajosa para detectar la ubicación de los receptores neuronales afectados por la neurotoxina en cuestión. También es posible conjugar biotina con una secuencia de nucleótidos como el ácido ribonucleico mensajero (ARNm) para encontrar dónde se traducen estas secuencias de nucleótidos en proteínas o para detectar la regulación del ARNm celular.
Es posible comprar anticuerpos monoclonales o policlonales biotinilados, aunque la producción de anticuerpos biotinilados está dentro de la capacidad de muchos experimentadores. Se pueden encontrar protocolos en línea que sugieren métodos de biotinilación de anticuerpos, aunque los protocolos más fáciles de seguir vinculan directamente la biotina a un anticuerpo en lugar de sugerir cómo intercalar un espaciador molecular. Los espaciadores moleculares entre la biotina y su anticuerpo asociado permiten un mayor espaciamiento para exponer más moléculas a los sitios de unión, y estos anticuerpos de biotina generalmente se compran en lugar de fabricarse.