Un dosage immuno-enzymatique (ELISA) est un test couramment utilisé en immunologie pour détecter des antigènes ou des anticorps. Les antigènes provoquent une réaction du système immunitaire, c’est-à-dire qu’ils provoquent des maladies. ELISA est utilisé pour détecter de nombreux antigènes bactériens et viraux, y compris le virus de l’immunodéficience humaine (VIH), le paludisme, le choléra, la rougeole et les oreillons. Un protocole ELISA légèrement différent peut être utilisé pour détecter les anticorps dirigés contre ces agents pathogènes et de nombreux autres. Un protocole ELISA est la procédure étape par étape pour effectuer un ELISA spécifique.
Bien que le protocole ELISA varie légèrement, selon le type d’ELISA effectué, le concept de base est le même pour tous. L’ELISA dépend d’anticorps liés à une enzyme, également appelés antiglobulines. Une molécule signal attachée à ces antiglobulines provoque le changement de couleur d’un substrat ajouté pendant le dosage, si l’antigène ou l’anticorps souhaité est présent. La quantité d’antigène ou d’anticorps présente est proportionnelle à la quantité de changement de couleur, qui peut être mesurée avec un lecteur de plaque électronique.
Il existe trois principaux types d’ELISA. Un ELISA direct est généralement utilisé pour détecter des antigènes plutôt que des anticorps. Il s’agit du protocole ELISA le plus simple, car l’anticorps lié à l’enzyme se lie directement à l’antigène souhaité. Un substrat est ensuite ajouté pour déterminer la quantité d’antigène présent.
Un ELISA indirect est utilisé pour détecter les anticorps, tandis qu’un autre type d’ELISA indirect – appelé ELISA sandwich – peut être utilisé pour détecter les antigènes. Un protocole ELISA sandwich nécessite deux anticorps, appelés anticorps de capture et de détection, pour se lier à l’antigène souhaité. Une antiglobuline est ajoutée, qui se lie à l’anticorps de détection, et le substrat est ajouté. L’ELISA indirect suit un protocole similaire, mais utilise un antigène de capture plutôt qu’un anticorps de capture afin de détecter l’anticorps souhaité.
L’ELISA compétitif est souvent utilisé pour détecter les antigènes présents à de faibles concentrations, car il s’agit d’un test très sensible. Contrairement aux autres protocoles ELISA, ELISA compétitif utilise un antigène lié à une enzyme au lieu d’un anticorps, et une méthode de quantification légèrement différente. Dans celui-ci, l’échantillon contenant l’antigène à détecter et l’antigène lié à une enzyme sont tous deux ajoutés à un anticorps, et les deux antigènes sont en compétition pour les sites de liaison à l’anticorps. Lorsque le substrat est ajouté, le changement de couleur est plus important, avec un rapport plus élevé d’antigènes liés à une enzyme liés aux antigènes d’échantillon liés. Cela signifie qu’un changement de couleur plus important est détecté à des concentrations plus faibles de l’antigène de l’échantillon, ce qui rend cette méthode si sensible.