SYBR Green® est un colorant fluorescent qui se lie à l’ADN double brin avec une grande spécificité. Il est largement utilisé dans la recherche en biologie moléculaire pour quantifier et visualiser l’ADN double brin. SYBR Green® est un colorant synthétique, qui a été introduit au début des années 1990 par Molecular Probes®, Inc., une filiale d’Invitrogen&trade Corporation. Il s’agit d’un colorant cyanine asymétrique, les cyanines étant une famille de colorants organiques synthétiques utilisés dans la photographie, les supports CD-R et DVD-R, et dans diverses applications de recherche en biologie moléculaire.
Plusieurs caractéristiques rendent SYBR Green® particulièrement utile comme colorant d’acide nucléique. Il est stable sur une plage de températures, ce qui signifie qu’il peut être utilisé pour surveiller les réactions biochimiques qui se déroulent à des températures élevées et basses. Il se lie de manière non covalente à la surface de l’ADN, ce qui signifie qu’il n’interférera pas avec l’activité de la plupart des nucléases et des ADN polymérases. Il se lie également aux acides nucléiques sur une plage linéaire dynamique allant jusqu’à quatre ordres de grandeur, de sorte qu’il peut donner une quantification précise de l’ADN sur une large plage de concentrations.
Les utilisations de laboratoire les plus courantes de SYBR Green® sont la détection d’ADN double brin dans une réaction en chaîne par polymérase (PCR) en temps réel et dans des gels d’acrylamide. La PCR est une technique permettant d’amplifier quelques copies d’ADN à travers des cycles répétés de réplication de l’ADN. La PCR en temps réel mesure l’amplification au fur et à mesure qu’elle se produit, et puisque SYBR Green® se lie à l’ADN double brin, la mesure de l’émission de fluorescence du complexe ADN-colorant permet au chercheur de quantifier la quantité d’ADN produite. Au fur et à mesure que les cycles de PCR progressent, il y a une augmentation de la fluorescence proportionnelle à la quantité de produit PCR produit.
Les gels d’acrylamide sont omniprésents dans les laboratoires de biologie moléculaire, car ils servent à séparer les fragments d’ADN par taille. SYBR Green® permet au chercheur de visualiser l’ADN dans un gel d’acrylamide en y projetant une lumière de la longueur d’onde appropriée. D’autres utilisations de SYBR Green® incluent la détection d’acides nucléiques en solution, dans les applications de biopuce et en cytométrie de flux. Le complexe ADN-colorant absorbe la lumière bleue à 488 nm et émet de la lumière verte à 522 nm.
SYBR Green® est très sensible ; il est 25 fois plus sensible que le bromure d’éthidium, un autre colorant couramment utilisé pour visualiser l’ADN. La haute affinité de SYBR Green® pour l’ADN double brin le rend utile pour détecter des échantillons d’ADN avec un faible nombre de copies. Il se lie préférentiellement à l’ADN double brin, mais il peut également se lier à l’ADN simple brin avec une fluorescence réduite. Comme toute molécule liant l’ADN, SYBR Green® peut provoquer des mutations et est un cancérigène possible. Il est cependant plus sûr à utiliser et plus facile à éliminer que le bromure d’éthidium.