Un test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) è un test comune utilizzato in immunologia per rilevare antigeni o anticorpi. Gli antigeni provocano una reazione del sistema immunitario, in altre parole causano malattie. L’ELISA viene utilizzato per rilevare molti antigeni batterici e virali, inclusi il virus dell’immunodeficienza umana (HIV), la malaria, il colera, il morbillo e la parotite. Un protocollo ELISA leggermente diverso può essere utilizzato per rilevare gli anticorpi contro questi e molti altri agenti patogeni. Un protocollo ELISA è la procedura passo passo per eseguire un ELISA specifico.
Sebbene il protocollo ELISA vari leggermente, a seconda del tipo di ELISA eseguito, il concetto di base è lo stesso per tutti. L’ELISA dipende da anticorpi legati all’enzima, chiamati anche antiglobuline. Una molecola segnale attaccata a queste antiglobuline fa sì che un substrato aggiunto durante il dosaggio cambi colore, se è presente l’antigene o l’anticorpo desiderati. La quantità di antigene o anticorpo presente è proporzionale alla quantità di cambiamento di colore, che può essere misurata con un lettore di piastre elettronico.
Esistono tre tipi principali di ELISA. Un ELISA diretto viene solitamente utilizzato per rilevare gli antigeni piuttosto che gli anticorpi. Questo è il protocollo ELISA più semplice, poiché l’anticorpo legato all’enzima si lega direttamente all’antigene desiderato. Il substrato viene quindi aggiunto per determinare la quantità di antigene presente.
Un ELISA indiretto viene utilizzato per rilevare gli anticorpi, mentre un altro tipo di ELISA indiretto, chiamato ELISA a sandwich, può essere utilizzato per rilevare gli antigeni. Un protocollo ELISA sandwich richiede due anticorpi, chiamati anticorpi di cattura e rilevamento, per legarsi all’antigene desiderato. Viene aggiunta un’antiglobulina, che si lega all’anticorpo di rilevamento, e viene aggiunto il substrato. L’ELISA indiretto segue un protocollo simile, ma utilizza un antigene di cattura anziché un anticorpo di cattura per rilevare l’anticorpo desiderato.
L’ELISA competitivo viene spesso utilizzato per rilevare gli antigeni presenti in basse concentrazioni, poiché è un test molto sensibile. A differenza degli altri protocolli ELISA, l’ELISA competitivo utilizza un antigene legato all’enzima invece di un anticorpo e un metodo di quantificazione leggermente diverso. In esso, il campione contenente l’antigene da rilevare e l’antigene legato all’enzima vengono entrambi aggiunti a un anticorpo e i due antigeni competono per i siti di legame dell’anticorpo. Quando viene aggiunto il substrato, il cambiamento di colore è maggiore, con un rapporto più elevato tra antigeni legati all’enzima e antigeni del campione legati. Ciò significa che viene rilevato un cambiamento di colore più elevato a concentrazioni inferiori dell’antigene del campione, che è ciò che rende questo metodo così sensibile.