Die ELISA-Methode ist ein Test, der in der Immunologie und anderen wissenschaftlichen Bereichen zum Nachweis von Antikörpern und Antigenen verwendet wird. ELISA steht für Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, was darauf hinweist, dass an Enzyme gekoppelte Antikörper verwendet werden, um die Testergebnisse zu bestimmen. Das ELISA-Verfahren wird in der Medizin zum Nachweis von Antikörpern gegen Krankheiten als diagnostische Maßnahme eingesetzt und ist eine gängige Technik in der immunologischen und biochemischen Forschung.
Der ELISA-Test wurde in den 1960er und 1970er Jahren als Ersatz für immunologische Tests entwickelt, bei denen radioaktive Antikörper und Antigene verwendet wurden. Die Risiken der Verwendung radioaktiver Materialien machten den Testprozess umständlich und unsicher, und das Aufkommen der ELISA-Methode löste beide Probleme. Statt radioaktives Material zur Bestimmung der Testergebnisse zu verwenden, verwendet der ELISA Enzyme, die mit Antikörpern zu farbigen Produkten reagieren. Die Farbentwicklung in einem ELISA-Test weist auf ein positives Ergebnis hin.
Es gibt verschiedene Arten von ELISA-Tests. Die am häufigsten verwendete ELISA-Methode wird indirekter ELISA genannt; Dies ist ein Antikörpertest, mit dem festgestellt wird, ob und in welcher Konzentration ein bestimmter Antikörpertyp in einer Probe vorhanden ist. In der diagnostischen Medizin wird dieser Test verwendet, um das Vorhandensein von Antikörpern gegen Infektionskrankheiten wie HIV, Hepatitis und andere nachzuweisen. Das Vorhandensein von Antikörpern gegen diese Krankheiten zeigt an, dass die getestete Person den Infektionserregern ausgesetzt war. Typischerweise handelt es sich bei der verwendeten Probe um Blut eines Patienten.
Bei diesem Test wird ein spezifisches Antigenprotein verwendet, um eine Mikrotiterplatte zu beschichten. Diese kleine Plastikplatte enthält 96 winzige Vertiefungen, und in jeder Vertiefung kann ein einzelner ELISA-Test durchgeführt werden. Welches Antigen für einen bestimmten Test verwendet wird, hängt von der Art des Antikörpers ab, den der Test nachzuweisen versucht. Wenn der ELISA beispielsweise für einen HIV-Test verwendet wird, wäre das verwendete Antigen spezifisch für dieses Virus.
Während der Test fortschreitet, werden kleine Mengen der unbekannten Probe in jede Vertiefung der Mikrotiterplatte gegeben und die Platte wird inkubiert, um den Antikörpern in der Probe Zeit zu geben, an das Antigen zu binden. Als nächstes wird jedem Well der Platte ein sekundärer Nachweisantikörper zugesetzt. Wenn die Probe einen der Antikörpertypen enthält, auf die getestet wird, wird sie während der nachfolgenden Inkubationszeit an den sekundären Nachweisantikörper binden.
Der Schlüssel zum ELISA-Verfahren besteht darin, dass der sekundäre Antikörper mit einer bestimmten Art von Enzym markiert ist. Das verwendete Enzym ist in der Lage, die Farbe der Testprobe zu verändern, wenn es mit seinem Substrat reagiert. Wenn eine Probe einen der zu testenden Antikörper enthält, führt die Zugabe des Substrats zu einer Vertiefung daher zu einer Farbänderung aufgrund des Vorhandenseins des sekundären Antikörpers und seines assoziierten Enzyms.
Es gibt andere Variationen der ELISA-Methode, einschließlich eines Tests, der als Sandwich-ELISA bezeichnet wird. Dies wird verwendet, um Antigene in einer Probe und nicht Antikörper nachzuweisen. Bei diesem Test wird die Mikrotiterplatte mit einer standardisierten Antikörperprobe beschichtet. Als nächstes wird die Antigen-Testprobe zugegeben, gefolgt von der Zugabe des sekundären Nachweisantikörpers und seines assoziierten Enzyms. Wie beim indirekten ELISA zeigt die Bildung eines farbigen Produktes ein positives Ergebnis an.