Ein Fluorescein-Isothiocyanat-konjugierter (FITC)-Antikörper ist ein fluoreszierender molekularer Marker, der entweder für ein bestimmtes Protein oder einen primären Antikörper hochspezifisch ist. Sie werden verwendet, um Proteine in der Immunzytochemie, Enzym- und Proteinaktivitätsassays, Durchflusszytometrie und Western-Blotting zu identifizieren. Die meisten FITC-Antikörper können über spezialisierte Molekularbiologie-Unternehmen erworben oder von einzelnen Forschungslabors hergestellt werden.
FITC ist ein Fluorochrom, das oft mit einem Antikörper konjugiert oder verknüpft ist, um einen spezifischen, fluoreszierenden Marker herzustellen. Wenn sie elektromagnetischer Energie einer bestimmten Wellenlänge ausgesetzt werden, sind Fluorochrome Chemikalien, die die Energie absorbieren und ein Photon einer bestimmten Wellenlänge emittieren. FITC absorbiert Energie bei 495 nm und emittiert ein Photon bei 521 nm. Jedes Fluorochrom hat einen anderen Absorptions- und Emissionsbereich, was den systematischen Nachweis vieler Fluorchrom-gebundener Antikörper in einem Gewebestück oder einer Probe ermöglicht. Dies ist vergleichbar damit, verschiedene Teile einer Zelle mit verschiedenen Farben zu beschriften und dann mit einer speziellen Brille jeweils nur eine Farbe zu betrachten.
Antikörper können an das FITC-Molekül gebunden oder konjugiert werden, um einen FITC-Antikörper zu produzieren. Dieser FITC-Antikörper kann verwendet werden, um ein Protein direkt oder indirekt zu markieren. Wenn ein FITC-Antikörper ein Protein direkt markiert, fungiert er als primärer Antikörper oder als Antikörper in direktem Kontakt mit dem Antigen. Die indirekte Verwendung eines FITC-Antikörpers erfolgt, wenn er als sekundärer Antikörper verwendet wird und spezifisch an einen primären Antikörper bindet. Wenn ein FITC-konjugierter Antikörper direkt verwendet wird, dauert das Markierungsverfahren weniger Zeit, aber die Markierung ist nicht so stark. Die indirekte Markierung erfordert einen zusätzlichen Schritt, aber das Signal oder die Markierung wird amplifiziert, da mehrere FITC-markierte Sekundärantikörper an einen einzigen Primärantikörper binden können.
Es gibt viele Anwendungen für den FITC-Antikörper in der Zell- und Molekularbiologie. Dieser Antikörpertyp kann allein oder in Kombination mit anderen monoklonalen oder polyklonalen Antikörpern verwendet werden, um spezifische Proteine in Zellen in einer als Immunzytochemie bekannten Technik zu markieren. FITC-Antikörper können auch in solchen Techniken wie Enzym- und Proteinaktivitätsassays, Durchflusszytometrie und Western-Blotting verwendet werden.
FITC-konjugierte Primär- und Sekundärantikörper sind bei vielen Molekularbiologie-Unternehmen weit verbreitet. Es ist auch möglich, dass Labore ihre eigenen Primärantikörper herstellen und dann ein Kit verwenden, um FITC daran zu konjugieren. Einige Unternehmen nehmen im Labor hergestellte Primärantikörper und konjugieren sie für ein Labor mit dem FITC-Fluorochrom. FITC-konjugierte Sekundärantikörper werden in der Regel nicht von einzelnen Forschungslabors hergestellt und in der Regel von Unternehmen bezogen, die auf die Herstellung von Sekundärantikörpern spezialisiert sind.