Geschlechtsbeobachtung und -testung für Frauen wird bei den Olympischen Spielen seit etwa den 1960er Jahren praktiziert. Es wird angenommen, dass die obligatorische Praxis begonnen hat, nachdem ein Athlet 1966 einen Geschlechtschromosomentest nicht bestanden hat. Die Tests werden verwendet, um männliche Athleten zu erkennen, die sich als Frauen ausgeben, um sich bei den Spielen einen Wettbewerbsvorteil zu verschaffen. Auch weibliche Athleten, die an den Olympischen Spielen 1976 in Montreal teilnahmen, mussten einen Geschlechtstest machen. Die einzige Ausnahme soll Prinzessin Anne, die Tochter von Königin Elizabeth II., gemacht haben, die als Mitglied der britischen Pferdesportmannschaft antrat. Einige argumentieren, dass dies möglicherweise nicht der Fall ist, da Männer und Frauen in Reitspielen gegeneinander antreten. Der weit verbreitete Glaube ist jedoch, dass Prinzessin Anne die einzige olympische Athletin war, die von Geschlechtstests ausgenommen war, als das Training obligatorisch war. Ab 1999 waren Geschlechtstests bei den Olympischen Spielen nicht obligatorisch. Bei Verdacht auf eine bestimmte Sportlerin kann das Internationale Olympische Komitee jedoch einen Geschlechtstest verlangen. Geschlechtertests bei Olympischen Spielen sind aufgrund des Fehlens absolut zuverlässiger Testmethoden seit langem ein umstrittenes Thema. Die Testmethoden haben sich im Laufe der Jahre mit körperlichen Untersuchungen, Chromosomentests und Hormontests verändert.
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Die amerikanische Sportlerin Helen Stephens wurde bei den Olympischen Spielen 1936 zu Unrecht beschuldigt, ein Mann zu sein. Der Verdacht verschwand, nachdem sie einen Geschlechtstest bestanden hatte.
Die Deutsche Dora Ratjen verlor 1938 ihre Goldmedaille, weil sie sich bei den Olympischen Spielen als Frau ausgegeben hatte. Es stellte sich heraus, dass sein Geschlecht bei der Geburt falsch zugeordnet wurde und er als Frau erzogen wurde.
Die Geschlechtsumwandlung zweier olympischer Athleten in den 1930er Jahren, der Britin Mary Weston und des Tschechoslowaken Zdenek Koubkov, förderte die Politik der Geschlechtertests für weibliche Teilnehmer an den Olympischen Spielen.