Un dosage immuno-enzymatique (ELISA) est un test effectué dans un laboratoire d’immunologie pour déterminer les niveaux de protéines dans un échantillon biologique. La détection ELISA fait référence à l’étape finale du test dans laquelle une solution claire, ou un substrat, est ajouté à une plaque en plastique contenant un anticorps lié marqué par une enzyme. L’enzyme clive le substrat et un changement de couleur se produit. L’absorbance lumineuse de la solution colorée finale est ensuite mesurée sur un lecteur de plaque ELISA ou un spectrophotomètre.
Il existe différents types de tests ELISA, les deux plus courants étant l’ELISA indirect et l’ELISA de capture, ou sandwich. L’ELISA indirect est utilisé pour détecter une protéine, appelée anticorps, dans le sérum d’un patient. Un exemple de test ELISA indirect est le test du virus de l’immunodéficience humaine (VIH) utilisé pour détecter les anticorps contre le VIH. Le test ELISA sandwich détecte une protéine, ou antigène, en la capturant entre deux anticorps. La détection de l’hormone gonadotrophine chorionique humaine (hCG), qui est élevée pendant la grossesse, se fait avec un test ELISA sandwich.
Les deux tests ont une étape de détection ELISA à la fin du test. Cette étape implique l’ajout d’un anticorps auquel est attachée une molécule d’enzyme. Après l’ajout de l’anticorps marqué par une enzyme, une solution incolore, contenant la molécule de substrat spécifique de cette enzyme, est ajoutée. L’enzyme clive la molécule substrat et la solution change de couleur en fonction de la combinaison utilisée. La détermination de la quantité d’anticorps ou d’antigène dans l’échantillon du patient se fait en mesurant l’intensité du changement de couleur.
Il existe plusieurs combinaisons de substrats enzymatiques disponibles pour une utilisation dans l’étape de détection ELISA. L’enzyme la plus courante est la peroxydase de raifort (HRP), qui peut cliver les molécules de substrat dichlorhydrate d’ortho-phénylènediamine (OPD) et de tétraméthylbenzidine (TMB), entre autres. Le clivage de l’OPD et du TMB donne une couleur jaune, et la densité optique ou l’absorbance de la lumière de ces substrats est mesurée par un lecteur de plaque ELISA. L’absorbance lumineuse de l’OPD est mesurée à une longueur d’onde de 490 nanomètres (nm) tandis que la TMB est mesurée à 450 nm.
Une autre enzyme couramment utilisée dans l’étape de détection ELISA est la phosphatase alcaline. Cette enzyme est utilisée avec le substrat p-nitrophényl phosphate (PNPP) et produit également une solution jaune. Le PNPP absorbe la lumière à une longueur d’onde de 405 nm.
La sélection des combinaisons de substrats enzymatiques est généralement basée sur les anticorps marqués par des enzymes disponibles dans le commerce, ainsi que sur l’équipement qui sera utilisé pour mesurer l’absorbance de la lumière. Les nombreuses combinaisons disponibles pour la détection ELISA rendent le test ELISA très polyvalent. C’est un outil important dans les laboratoires de recherche et de dépistage des maladies.