Todas as corridas de mountain bike exigem um intenso grau de preparação física e mental, mas nenhuma é mais exigente do que a corrida de 24 horas. Um percurso de corrida definido é projetado para uma corrida de 24 horas e os ciclistas de montanha têm como objetivo fazer o maior número de voltas no período de 24 horas. Isso significa que os ciclistas devem andar de bicicleta durante a noite com as luzes instaladas nos capacetes ou no guidão, ou em ambos. Uma corrida de 24 horas normalmente começa ao meio-dia de um sábado e termina ao meio-dia de um domingo, e embora muitos pilotos planejem paradas de descanso – variando de dez minutos a uma hora ou mais – outros, mais competitivos, corredores farão uma corrida sem parar para toda a corrida de 24 horas, sem contar breves paradas para troca de roupa ou equipamento.
Um dos aspectos mais exigentes de uma corrida de 24 horas é a preparação envolvida. Como um ciclista deve se comprometer a andar de bicicleta por 24 horas, as demandas físicas do corpo são grandes e, portanto, o corpo precisa de suporte. Muita comida e água são essenciais. O corpo queimará uma quantidade imensa de calorias e usará mais água do que o corpo está acostumado a usar em um período de 24 horas, portanto, alimentos ricos em carboidratos e facilmente digeríveis são essenciais, assim como uma abundância de água e bebidas que substituem eletrólitos.
Uma corrida de 24 horas também é exigente em uma bicicleta, o que requer uma equipe de apoio na maioria dos casos, ou pelo menos uma habilidade mecânica completa em relação à bicicleta por parte do ciclista. Como a corrida dura 24 horas ininterruptas, os reparos devem ser feitos com rapidez e eficiência se e quando surgirem. Ter uma equipe de apoio ajuda a transição do ciclista através da área de largada e chegada de forma rápida e eficiente, permitindo mais tempo para andar na bicicleta.
À noite, os pilotos devem se equipar com luzes fortes para percorrer as trilhas escuras. Podem ser montados no capacete ou no guiador da bicicleta. As luzes funcionam com baterias fortes e têm tempos de execução variáveis, geralmente necessitando de mais de uma luz. As luzes para uma corrida de 24 horas variam em design, desde luzes LED a halógenas e outros tipos de luzes.
Uma corrida de 24 horas pode ser realizada individualmente, com um piloto competindo por conta própria, ou em equipe. As categorias das equipes variam de acordo com a corrida, mas geralmente são mistas e variam de duplas a equipes de 5 pilotos. Enquanto andar em equipe torna a conservação de energia mais fácil para os pilotos, também pode causar cãibras enquanto os membros da equipe esperam sua vez para dar uma volta, bem como cansaço mental e desgaste da motivação. Este aspecto da corrida de 24 horas – seja corrida solo ou em equipe – torna a exaustão mental uma parte tão grande da corrida quanto a exaustão física.