La fluorescenza quantitativa è l’esibizione della radiazione emessa in un campione. Utilizzando la tecnologia di imaging, uno scienziato può raccogliere informazioni sul campione e utilizzarlo per saperne di più sulla sua struttura o funzione. Questo approccio è comunemente usato in biologia per studiare singole cellule e interi organismi. Richiede l’accesso a un laboratorio che contenga apparecchiature per microscopia e telecamere di sensibilità adeguata. Esempi di immagini di questa forma di analisi possono essere visti in libri di testo e articoli scientifici, insieme a discussioni sui dati ottenuti.
I campioni preparati per l’imaging al microscopio possono essere colorati con etichette fluorescenti, come proteine che si attaccano a strutture specifiche nella cellula. Quando questi tag vengono visualizzati attraverso una telecamera nelle giuste condizioni, si illuminano. La semplice osservazione dell’illuminazione può fornire informazioni importanti per il ricercatore. Ad esempio, un immunologo alla ricerca di tracce di un anticorpo specifico potrebbe utilizzare un tag per identificarlo. Questo è un esempio di fluorescenza qualitativa, in cui l’illuminazione fornisce informazioni generali sulle qualità del campione.
Nelle misurazioni della fluorescenza quantitativa, il ricercatore raccoglie informazioni specifiche e misurabili. Ciò potrebbe includere dati sull’esatta intensità della luce. Un ulteriore trattamento del campione può offrire opportunità per tecniche di imaging avanzate come il Fluorescent Recovery After Photobleaching (FRAP), che fornisce informazioni sul movimento delle strutture all’interno dei campioni. Tutte queste tecniche quantitative di fluorescenza possono offrire nuove informazioni su cos’è una struttura, come funziona e cosa contiene.
Per questo tipo di lavoro sono necessarie attrezzature di precisione. Eventuali trattamenti fluorescenti aggiunti a un campione devono essere preparati con cura in modo da etichettare le strutture desiderate e nient’altro. L’apparecchiatura deve essere adeguatamente sensibile e calibrata per confermare che sta raccogliendo informazioni accurate. Se il rilevatore di una fotocamera digitale è spento, ad esempio, potrebbe non raccogliere la fluorescenza in alcune parti del campione o potrebbe generare una lettura errata. In entrambi i casi i dati sarebbero errati.
I laboratori di patologia possono utilizzare la fluorescenza quantitativa per la valutazione di alcuni campioni. Questa tecnica è anche ampiamente utilizzata nella ricerca. Alcune immagini molto sorprendenti possono essere sviluppate con l’assistenza di tag fluorescenti per separare strutture come nervi o proteine specifiche. Oltre ad essere visivamente notevoli, le immagini possono contenere una ricchezza di informazioni per i ricercatori con la capacità di leggerle. È possibile analizzare immagini di fluorescenza quantitativa con programmi informatici avanzati per estrarre più dati e generare risultati significativi.