La procédure ELISA commence à la clinique, avec un échantillon de sang prélevé sur le patient. Un certain nombre d’étapes sont ensuite suivies à l’aide du kit de test ELISA en laboratoire. Le test détectera la présence d’anticorps ou d’antigènes d’une maladie, comme le VIH, dans le sang. Les étapes comprennent l’ajout de diverses substances et le lavage et les résultats sont généralement mesurés par un changement de couleur.
Le dosage immuno-enzymatique (ELISA), également appelé dosage immunoenzymatique (EIA), est utilisé comme test de diagnostic. Il est surtout connu comme test de diagnostic du VIH. La plaque de test se compose généralement de 96 petits puits dans lesquels un antigène spécifique est immobilisé. Si l’anticorps est présent dans l’échantillon de sérum, il se liera à l’antigène, permettant la détection via les différentes étapes de la procédure ELISA.
La première étape de la procédure ELISA consiste à obtenir un échantillon du patient. Ceci est fait par une infirmière, dans des conditions stériles. Le sang est généralement prélevé dans une veine du bras ou de la main. Un garrot est placé sur le bras pour gonfler la veine et faciliter la procédure et la peau est nettoyée à l’endroit où l’aiguille sera insérée. Une petite piqûre peut être ressentie au fur et à mesure que l’aiguille entre et le sang sera recueilli dans un tube stérile.
Une fois l’échantillon de sang prélevé, il est transféré au laboratoire où le reste de la procédure ELISA sera effectué par un technicien de laboratoire. L’échantillon de sang est d’abord ajouté aux puits de la plaque ELISA. Si l’anticorps spécifique est présent, il se lie à l’antigène. La plaque est ensuite lavée, à l’aide d’un tampon, pour éliminer les anticorps non liés.
Un deuxième anticorps, normalement d’origine animale, auquel est attachée une enzyme, est ensuite ajouté, qui se fixera sur le complexe anticorps-antigène. La plaque est à nouveau lavée, pour éliminer l’excès. L’enzyme est réactive à la couleur lorsqu’un substrat est ajouté à la fin de la procédure ELISA. C’est la mesure du degré de changement de couleur qui donne le résultat.
La procédure ELISA doit être suivie attentivement pour éviter les faux résultats. Dans la plupart des plaques ELISA, un contrôle positif et négatif est inclus, afin de minimiser ces faux résultats. Lors d’un test de dépistage du VIH, un résultat positif sera généralement suivi d’un deuxième test de confirmation, souvent d’un type différent, tel qu’un Western Blot.