Un anticorps conjugué à l’isothiocyanate de fluorescéine (FITC) est un marqueur moléculaire fluorescent hautement spécifique d’une protéine particulière ou d’un anticorps primaire. Ils sont utilisés pour identifier les protéines dans les tests d’immunocytochimie, d’activité enzymatique et protéique, la cytométrie en flux et le transfert Western. La plupart des anticorps FITC peuvent être achetés auprès de sociétés de biologie moléculaire spécialisées ou fabriqués par des laboratoires de recherche individuels.
Le FITC est un fluorochrome souvent conjugué ou lié à un anticorps afin de fabriquer un marqueur fluorescent spécifique. Lorsqu’ils sont exposés à une énergie électromagnétique à une longueur d’onde spécifique, les fluorochromes sont des produits chimiques qui absorbent l’énergie et émettent un photon à une longueur d’onde spécifique. Le FITC absorbe l’énergie à 495 nm et émet un photon à 521 nm. Chaque fluorochrome a une plage d’absorption et d’émission différente, permettant la détection systématique de nombreux anticorps liés au fluorochrome dans un morceau de tissu ou d’échantillon. Cela revient à étiqueter différentes parties d’une cellule avec différentes couleurs, puis à utiliser des lunettes spécialisées pour ne regarder qu’une seule couleur à la fois.
Les anticorps peuvent être liés ou conjugués à la molécule FITC pour produire un anticorps FITC. Cet anticorps FITC peut être utilisé pour marquer directement ou indirectement une protéine. Lorsqu’un anticorps FITC marque directement une protéine, il agit comme l’anticorps primaire, ou un anticorps en contact direct avec l’antigène. L’utilisation indirecte d’un anticorps FITC se produit lorsqu’il est utilisé comme anticorps secondaire, se liant spécifiquement à un anticorps primaire. Lorsqu’un anticorps conjugué FITC est utilisé directement, la procédure de marquage prend moins de temps, mais le marquage n’est pas aussi fort. Le marquage indirect nécessite une étape supplémentaire, mais le signal ou le marqueur est amplifié car plusieurs anticorps secondaires marqués FITC peuvent se fixer à un seul anticorps primaire.
Il existe de nombreuses utilisations de l’anticorps FITC en biologie cellulaire et moléculaire. Ce type d’anticorps peut être utilisé seul ou en combinaison avec d’autres anticorps monoclonaux ou polyclonaux pour marquer des protéines spécifiques dans les cellules dans une technique connue sous le nom d’immunocytochimie. Les anticorps FITC peuvent également être utilisés dans des techniques telles que les dosages d’activité enzymatique et protéique, la cytométrie en flux et le transfert Western.
Les anticorps primaires et secondaires conjugués au FITC sont largement disponibles auprès de nombreuses sociétés de biologie moléculaire. Il est également possible pour les laboratoires de préparer leurs propres anticorps primaires, puis d’utiliser un kit pour y conjuguer FITC. Certaines entreprises prendront des anticorps primaires préparés en laboratoire et les conjugueront au fluorochrome FITC pour un laboratoire. Les anticorps secondaires conjugués au FITC ne sont généralement pas fabriqués par des laboratoires de recherche individuels et sont généralement achetés auprès de sociétés spécialisées dans la production d’anticorps secondaires.