O procedimento ELISA começa na clínica, com uma amostra de sangue colhida do paciente. Uma série de etapas são seguidas usando o kit de teste ELISA no laboratório. O teste detectará a presença de anticorpos ou antígenos de uma doença, como o HIV, no sangue. As etapas incluem adição de várias substâncias e lavagem e os resultados são geralmente medidos por uma mudança de cor.
O ensaio imunoenzimático (ELISA), também conhecido como ensaio imunoenzimático (EIA), é utilizado como teste diagnóstico. É mais conhecido como um teste diagnóstico para HIV. A placa de teste geralmente consiste em 96 pequenos poços nos quais um antígeno específico é imobilizado. Se o anticorpo estiver presente na amostra de soro, ele se ligará ao antígeno, permitindo a detecção por meio das várias etapas do procedimento de ELISA.
A primeira etapa do procedimento ELISA é obter uma amostra do paciente. Isso é feito por uma enfermeira, em condições estéreis. O sangue é geralmente retirado de uma veia do braço ou da mão. Um torniquete é colocado no braço para dilatar a veia e tornar o procedimento mais fácil e a pele é limpa onde a agulha será inserida. Uma pequena picada pode ser sentida quando a agulha entra e o sangue é coletado em um tubo estéril.
Após a coleta da amostra de sangue, ela é transferida para o laboratório, onde o restante do procedimento ELISA será realizado por um técnico de laboratório. A amostra de sangue é primeiro adicionada às cavidades da placa de ELISA. Se o anticorpo específico estiver presente, ele se liga ao antígeno. A placa é então lavada, usando um tampão, para remover os anticorpos não ligados.
Em seguida, adiciona-se um segundo anticorpo, normalmente de origem animal, que possui uma enzima ligada a ele, que se ligará ao complexo anticorpo-antígeno. A placa é novamente lavada, para retirar o excesso. A enzima é reativa à cor quando um substrato é adicionado no final do procedimento ELISA. É a medição do grau de mudança de cor que dá o resultado.
O procedimento ELISA deve ser seguido cuidadosamente para evitar resultados falsos. Na maioria das placas de ELISA, um controle positivo e um controle negativo são incluídos, para minimizar esses resultados falsos. Ao fazer o teste de HIV, um resultado positivo geralmente será seguido por um segundo teste confirmatório, geralmente de um tipo diferente, como um Western Blot.