Un reagente di trasfezione è un vettore per il DNA che un ricercatore può utilizzare per inserire il DNA nelle cellule in coltura. Numerosi tipi di reagenti sono disponibili presso le società di scienze della vita e i ricercatori possono anche svilupparne di propri per applicazioni personalizzate. Queste molecole possono funzionare in diversi modi per trasportare il DNA nelle cellule bersaglio e inserirlo nel loro genoma. Il processo tipico prevede la miscelazione del DNA desiderato con il reagente, l’aggiunta alle cellule in coltura, l’incubazione e quindi lo screening per vedere quali contengono il nuovo DNA.
La trasfezione del DNA è uno strumento di ricerca molto importante. I ricercatori possono inserire materiale genetico per attivare i geni o silenziarli e possono utilizzare la trasfezione per costringere le cellule in coltura a comportarsi in un modo particolare. L’obiettivo può essere l’espressione genetica transitoria ai fini dello studio. Può anche essere una modifica permanente che consentirà al ricercatore di creare una colonia di cellule clonate che esprimono tutte lo stesso gene. Queste cellule possono essere utilizzate nella ricerca e possono avere applicazioni terapeutiche.
Il fosfato di calcio è uno dei più antichi reagenti di trasfezione. I ricercatori utilizzano anche materiali a base di lipidi, che tendono ad essere molto efficaci. Possono anche utilizzare vettori di DNA virale e metodi meccanici come la microiniezione, in cui il DNA desiderato viene iniettato direttamente per ridurre il rischio di degradazione del materiale. Le pistole genetiche sono un altro strumento popolare per la trasfezione del DNA.
Quando un ricercatore seleziona un reagente di trasfezione, ci sono una serie di considerazioni. Questi includono come verrà utilizzato il reagente, che tipo di DNA è coinvolto e che tipo di effetti desidera il ricercatore. Il reagente di trasfezione non è sempre perfettamente affidabile e il ricercatore ha anche bisogno di un buon strumento di screening per trovare e isolare le cellule trasfettate con successo. Ciò consentirà ai ricercatori di scartare le cellule che non hanno accettato il nuovo materiale genetico insieme alle cellule che lo hanno fatto, ma lo esprimono in un modo insolito che suggerisce che potrebbe essersi verificata una certa degradazione del DNA.
Gli elenchi dei reagenti per la trasfezione del DNA sono disponibili presso le società di scienze biologiche. La maggior parte dispone di un grafico per aiutare i ricercatori a decidere quale utilizzare, in base al tipo di cellula e al tipo di materiale genetico che il ricercatore vuole inserire. I ricercatori di solito possono richiedere campioni per consentire loro di testare un reagente prima di impegnarsi nel suo utilizzo nella ricerca. È importante leggere attentamente la documentazione per assicurarsi che il funzionamento del reagente di trasfezione sia completamente compreso prima dell’uso.