O teste de endotoxina bacteriana normalmente envolve o uso de reagentes que, quando misturados em uma solução com um possível contaminante, causam uma reação, significando a presença de uma endotoxina. O teste cromogênico, o teste de coágulo em gel e o teste turbidimétrico são os métodos que os cientistas comumente empregam para o teste de endotoxinas bacterianas. Os técnicos usam esses métodos de avaliação em uma variedade de substâncias e objetos ao verificar a contaminação por endotoxinas. Água, as matérias-primas usadas na fabricação de medicamentos, equipamentos e embalagens devem passar pelos padrões de endotoxinas.
Bactérias, fungos e vírus possuem membranas externas protetoras consistindo de lipopolissacarídeos, também conhecidos como LPS. A porção lipídica dessas cadeias contém endotoxinas. Essas substâncias geralmente ficam dentro da membrana, mas são liberadas durante o processo de divisão celular e durante a destruição ou lise celular. Em humanos, essas substâncias causam febre, coagulação anormal, choque séptico e outros sintomas, embora, ao contrário das exotoxinas dentro da célula, as endotoxinas não se convertam em um toxóide. Geralmente, os microbiologistas verificam a presença de endotoxinas associadas a várias bactérias gram-negativas, incluindo E. coli.
O teste de coágulo em gel, ou ensaio Limulus ameboecyte lysate (LAL), envolve o uso de um químico destruidor de membrana derivado dos amebócitos do caranguejo ferradura, também conhecido como Limulus polyphemus. Os técnicos observam uma indicação positiva de endotoxinas se ocorrer coagulação ou gelificação quando o lisado é exposto ao objeto ou substância em questão. Microbiologistas normalmente usam este método de teste de endotoxina bacteriana em conjunto com testes cromogênicos e turbidimétricos para resultados conclusivos.
O teste de endotoxina bacteriana cromogênica usa um LAL especialmente tratado. Quando este lisado entra em contato com uma endotoxina, a reação produz uma cor específica. O processo de teste final inclui a medição da turbidez ou nebulosidade da solução. Os técnicos expõem a solução formada no teste de coágulo em gel a um espectrofotômetro, que emite um feixe de luz. Ao medir a perda de intensidade da luz no feixe à medida que ele passa pela solução, os microbiologistas podem determinar se uma endotoxina está ou não presente.
Os associados do laboratório geralmente realizam esses três testes de endotoxina bacteriana duas ou três vezes para garantir resultados precisos. O teste de gel não é usado exclusivamente porque seu limite mínimo de detecção é 0.03 unidades de Ehrlich por mililitro (EU / ml). Os testes cromogênicos e turbidimétricos detectam endotoxinas na faixa de 0.005 EU / ml. Os parâmetros de segurança variam muito, dependendo da substância que está sendo testada. Enquanto a água estéril usada para injeção ou irrigação não pode conter mais de 0.25 EU / ml, a água estéril para fins de inalação pode conter até 0.5 UE / ml.