Un anticuerpo conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) es un marcador molecular fluorescente altamente específico para una proteína particular o un anticuerpo primario. Se utilizan para identificar proteínas en inmunocitoquímica, ensayos de actividad enzimática y proteica, citometría de flujo y transferencia Western. La mayoría de los anticuerpos FITC pueden adquirirse a través de empresas especializadas en biología molecular o fabricarse en laboratorios de investigación individuales.
FITC es un fluorocromo que a menudo se conjuga o se une a un anticuerpo para producir un marcador fluorescente específico. Cuando se exponen a energía electromagnética en una longitud de onda específica, los fluorocromos son sustancias químicas que absorben la energía y emiten un fotón en una longitud de onda específica. FITC absorbe energía a 495 nm y emite un fotón a 521 nm. Cada fluorocromo tiene un rango de absorción y emisión diferente, lo que permite la detección sistemática de muchos anticuerpos ligados al fluorcromo en una pieza de tejido o muestra. Esto es similar a etiquetar diferentes partes de una celda con diferentes colores y luego usar lentes especializados para mirar solo un color a la vez.
Los anticuerpos se pueden unir o conjugar a la molécula de FITC para producir un anticuerpo de FITC. Este anticuerpo FITC se puede utilizar para marcar directa o indirectamente una proteína. Cuando un anticuerpo FITC marca directamente una proteína, actúa como el anticuerpo primario o como un anticuerpo en contacto directo con el antígeno. El uso indirecto de un anticuerpo FITC ocurre cuando se usa como un anticuerpo secundario, uniéndose específicamente a un anticuerpo primario. Cuando se usa directamente un anticuerpo conjugado con FITC, el procedimiento de marcado lleva menos tiempo, pero el marcado no es tan fuerte. El marcaje indirecto requiere un paso adicional, pero la señal o marca se amplifica porque varios anticuerpos secundarios marcados con FITC pueden unirse a un único anticuerpo primario.
El anticuerpo FITC tiene muchos usos en biología celular y molecular. Este tipo de anticuerpo puede usarse solo o en combinación con otros anticuerpos monoclonales o policlonales para marcar proteínas específicas dentro de las células en una técnica conocida como inmunocitoquímica. Los anticuerpos FITC también se pueden usar en técnicas tales como ensayos de actividad enzimática y proteica, citometría de flujo y transferencia Western.
Los anticuerpos primarios y secundarios conjugados con FITC están ampliamente disponibles a través de muchas compañías de biología molecular. También es posible que los laboratorios preparen sus propios anticuerpos primarios y luego usen un kit para conjugar FITC con ellos. Algunas empresas tomarán anticuerpos primarios preparados en laboratorio y los conjugarán con el fluorocromo FITC para un laboratorio. Los anticuerpos secundarios conjugados con FITC no suelen fabricarse en laboratorios de investigación individuales y, por lo general, se compran a empresas especializadas en la producción de anticuerpos secundarios.