El procedimiento de ELISA comienza en la clínica, extrayéndose una muestra de sangre del paciente. Luego se siguen una serie de pasos utilizando el kit de prueba ELISA en el laboratorio. La prueba detectará la presencia de anticuerpos o antígenos de una enfermedad, como el VIH, en la sangre. Los pasos incluyen la adición de varias sustancias y el lavado, y los resultados se miden generalmente mediante un cambio de color.
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), que también se conoce como inmunoensayo enzimático (EIA), se utiliza como prueba de diagnóstico. Es más conocida como prueba de diagnóstico del VIH. La placa de prueba generalmente consta de 96 pocillos pequeños en los que se inmoviliza un antígeno específico. Si el anticuerpo está presente en la muestra de suero, se unirá al antígeno, lo que permitirá la detección mediante los distintos pasos del procedimiento ELISA.
El primer paso del procedimiento ELISA es obtener una muestra del paciente. Esto lo realiza una enfermera, en condiciones estériles. Por lo general, la sangre se extrae de una vena del brazo o de la mano. Se coloca un torniquete en el brazo para hinchar la vena y facilitar el procedimiento y se limpia la piel donde se insertará la aguja. Es posible que sienta un pequeño pinchazo al introducir la aguja y se recogerá la sangre en un tubo estéril.
Una vez que se toma la muestra de sangre, se transfiere al laboratorio donde un técnico de laboratorio realizará el resto del procedimiento ELISA. La muestra de sangre se agrega primero a los pocillos de la placa ELISA. Si el anticuerpo específico está presente, se une al antígeno. A continuación, se lava la placa con un tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.
Luego se agrega un segundo anticuerpo, normalmente de origen animal, que tiene una enzima unida a él, que se unirá al complejo anticuerpo-antígeno. La placa se vuelve a lavar, para eliminar el exceso. La enzima reacciona con el color cuando se agrega un sustrato al final del procedimiento ELISA. Es la medida del grado de cambio de color lo que da el resultado.
El procedimiento ELISA debe seguirse cuidadosamente para evitar resultados falsos. En la mayoría de las placas de ELISA se incluye un control positivo y negativo para minimizar tales resultados falsos. Cuando se realiza una prueba del VIH, un resultado positivo generalmente será seguido por una segunda prueba de confirmación, a menudo de un tipo diferente, como una Western Blot.