La amplificaci?n de ARN es un proceso que toma algunas copias de una secci?n de ?cido ribonucleico (ARN) y crea miles de copias de composici?n id?ntica. Las piezas de ARN son macromol?culas, compuestas de cadenas de nucle?tidos, por lo que la amplificaci?n es un proceso de varios pasos que implica la reproducci?n de la secuencia exacta de nucle?tidos de una pieza de ARN. La amplificaci?n de ARN es ?til en la investigaci?n que involucra virus, cuyo material gen?tico puede almacenarse como ARN de memoria (ARNm) en lugar de ADN; el estudio de la expresi?n g?nica en organismos; y la creaci?n de prote?nas a partir de ARN transcripcional (ARNt). Para amplificar el ARN, se crea y amplifica una secuencia complementaria, que luego se utiliza como plantilla para la creaci?n de copias de ARN. Se necesita un intermediario de ADN para la amplificaci?n de ARN porque el ARN generalmente se produce solo en una forma monocatenaria, no emparejada, por lo que se debe crear una plantilla de ADN para que funcione la enzima transcriptasa de ARN; El ARN no se puede transcribir de s? mismo.
La secuencia de ARN de inter?s debe aislarse primero del material contaminante antes de que pueda comenzar la amplificaci?n de ARN. Una vez hecho esto, la enzima transcriptasa inversa se agrega a la plantilla de ARN. La transcriptasa inversa se usa para crear una secuencia de ADN celular (ADNc) de pares de bases complementarios al ARNm original. Esta primera cadena de ADNc se puede usar para crear segundas cadenas de ADNc que se pueden usar en la reacci?n en cadena de la polimerasa, un proceso que amplifica las cadenas de ADN a trav?s de ciclos repetidos de replicaci?n de ADN y la posterior separaci?n de las dos cadenas. El ADNc generalmente contiene cebadores o enzimas en un extremo de la secuencia de ADN, que sirven como se?ales para la uni?n de nucle?tidos y, por lo tanto, la producci?n de cadenas de ARNm que son id?nticas a la secuencia original.
Existen varios m?todos para la amplificaci?n de ARN, pero el m?todo que produce la mayor cantidad de ARNm que es fiel a la copia original se llama m?todo de cambio de plantilla. Este m?todo utiliza la enzima transcriptasa inversa del virus de la leucemia murina de Moloney, que agrega una regi?n de cebador al final del ADNc de la primera cadena despu?s de crear esta cadena a partir de la plantilla de ARN. Esta regi?n de cebador tambi?n se agrega a la segunda cadena de ADNc, a partir de la cual se hacen copias de ARN amplificadas. Otra enzima, llamada promotor, puede unirse a la regi?n del cebador en la segunda cadena de ADNc, lo que aumenta dr?sticamente la cantidad de copias de ARN que se producen a partir de esta cadena de ADNc a trav?s de la transcripci?n.