Un espectrofotómetro de fluorescencia, también conocido como fluorímetro, es un instrumento científico utilizado en espectroscopía de fluorescencia para determinar el espectro de fluorescencia de una muestra. Luego, este espectro se analiza para proporcionar o confirmar la identificación de la composición de la muestra. Un espectrofotómetro de fluorescencia a menudo se puede encontrar en laboratorios químicos, bioquímicos y médicos para ayudar en el análisis de compuestos orgánicos.
La espectroscopia de fluorescencia es el estudio de la fluorescencia de una muestra. Cuando ciertos compuestos pasan a través de la luz, luz ultravioleta (UV) en este caso, emiten una radiación de bajo nivel, a menudo revelada como luz visible. La fluorescencia resultante contiene diferentes longitudes de onda y, por lo tanto, observar sus espectros de emisión y excitación se puede utilizar para ayudar a identificar los elementos dentro del compuesto.
Un espectrofotómetro de fluorescencia contiene tradicionalmente un monocromador con una rejilla de difracción o un filtro que actúa como una rejilla de difracción. Los monocromadores son instrumentos científicos que permiten al usuario seleccionar una longitud de onda de luz particular utilizando una rejilla de difracción. Una vez que se selecciona la longitud de onda de excitación, se enfoca en la muestra, excitando las moléculas en su interior para que emitan fluorescencia. Se coloca un detector en un ángulo de 90 ° desde la luz de excitación para no contaminar el resultado con la luz de excitación. El resultado es un espectro de emisión.
Muchos tipos de espectrofotómetros de fluorescencia pueden registrar tanto un espectro de fluorescencia como un espectro de excitación. Los espectros de excitación son el resultado de mantener la longitud de onda de emisión en un valor particular, en lugar de una longitud de onda de excitación constante. Luego, este espectro pasa a través de muchas longitudes de onda diferentes y los resultados se registran para un análisis posterior. La intensidad de la fluorescencia es proporcional a la absorción de la luz en la muestra, lo que hace que los dos tipos de espectros sean idénticos.
Un ejemplo del uso de un espectrofotómetro de fluorescencia es estudiar la composición de la fluorescencia del escorpión cuando se encuentra bajo luz ultravioleta. No se sabe por qué los escorpiones emiten fluorescencia bajo radiación ultravioleta, y esta es un área de estudio biológico que permanece sin respuesta. Los científicos de California han demostrado que esta fluorescencia puede ayudar al escorpión a reconocer y detectar la luz ultravioleta.
No confunda la fluorescencia con la fosforescencia. El material fluorescente emite radiación cuando está bajo luz ultravioleta como resultado de la absorción de un fotón que excita los electrones del material. Cuando se quita la luz, el material ya no brilla. Los materiales fosforescentes almacenan la luz y luego la liberan gradualmente. Esta es la razón por la que los objetos que brillan en la oscuridad continúan brillando, incluso cuando las luces están apagadas.