L’ubiquitination fait référence à la liaison de la protéine ubiquitine à d’autres protéines par trois enzymes différentes. Un test d’ubiquitination est un test qui détermine dans quelle mesure ce processus se produit dans la cellule. Les tests peuvent être utilisés pour déterminer comment différentes conditions affectent la liaison aux protéines, les étapes et les structures qui sont importantes dans la voie d’ubiquitinnation, et la quantité de protéines dans la cellule. Des quantités insuffisantes ou surabondantes ont été liées au développement de nombreuses maladies différentes.
Protéine présente dans les cellules, l’ubiquitine a pour fonction de se lier aux protéines tout en fonctionnant comme un « tag » ou un signal vers d’autres structures. Cette « étiquette » signale alors aux enzymes de savoir que la protéine peut être détruite, recyclée ou déplacée. Le résultat est la destruction ou le transport de protéines.
Ces protéines de marquage sont importantes pour la réparation de l’ADN, les infections virales et la réponse immunitaire. D’autres fonctions importantes comprennent des rôles dans la mort cellulaire, la division cellulaire et le développement des cellules. Trop d’ubiquitine, ou son absence, peut jouer un rôle dans la formation de nombreuses maladies, telles que le cancer, les troubles génétiques et les maladies du système immunitaire.
Les chercheurs utiliseront un test d’ubiquitination pour tenter de déterminer quelles conditions modifient la concentration de la protéine dans la cellule et comparer les cellules malades avec les cellules saines. Les scientifiques l’utilisent également pour étudier les conditions qui provoqueront des changements dans la liaison. De plus, ils peuvent essayer de lier un code ADN spécifique à la quantité d’enzymes dans la cellule.
Il existe plus d’un type de test d’ubiquitination que les chercheurs utilisent spécifiquement. On déterminera le pourcentage de protéines liées à l’ubiquintine. Un autre examine l’activité des enzymes ou la présence de tout autre intermédiaire trouvé dans la voie d’ubiquination. Différents tests sont développés sur la base de la protéine cible à laquelle l’ubiquitine se lie.
La base d’un test d’ubiquitination consiste à incorporer un composé marqué à l’aide d’un autre produit chimique facilement mesurable. Dans les tests oncologiques, l’ubiquitine peut être marquée avec du cryptate, un composé qui contient deux atomes d’azote. Cela peut être utilisé pour déterminer quelle enzyme est la plus active dans la cellule.
Un essai d’ubiquitination comportera deux étapes. La première est une étape enzymatique où les enzymes vont lier l’ubiquitine marquée à la protéine cible. La seconde est une étape de détection dans laquelle la liaison de la protéine cible est examinée à l’aide d’un conjugué tel qu’un anticorps. L’anticorps va devenir fluorescent ou changer de couleur, ce qui permet alors au chercheur de déterminer l’activité des enzymes.