A amplifica??o de RNA ? um processo que leva algumas c?pias de uma se??o de ?cido ribonucleico (RNA) e cria milhares de c?pias com composi??o id?ntica. Peda?os de RNA s?o macromol?culas, compostas de cadeias de nucleot?deos, portanto a amplifica??o ? um processo de v?rias etapas que envolve a reprodu??o da sequ?ncia exata de nucleot?deos de um peda?o de RNA. A amplifica??o de RNA ? ?til em pesquisas envolvendo v?rus, cujo material gen?tico pode ser armazenado como RNA de mem?ria (mRNA) em vez de DNA; o estudo da express?o g?nica em organismos; e a cria??o de prote?nas a partir do RNA transcricional (tRNA). Para amplificar o RNA, uma sequ?ncia complementar ? criada e amplificada e depois usada como modelo para a cria??o de c?pias de RNA. Um intermedi?rio de DNA ? necess?rio para a amplifica??o do RNA, porque o RNA geralmente ocorre apenas em uma forma de fita simples e n?o emparelhada; portanto, um modelo de DNA deve ser criado para que a enzima RNA transcriptase funcione; O RNA n?o pode ser transcrito por si mesmo.
A sequ?ncia de RNA de interesse deve primeiro ser isolada do material contaminante antes que a amplifica??o do RNA possa come?ar. Depois disso, a enzima transcriptase reversa ? adicionada ao molde de RNA. A transcriptase reversa ? usada para criar uma sequ?ncia de DNA celular (cDNA) de pares de bases complementares ao mRNA original. Essa primeira cadeia de cDNA pode ent?o ser usada para criar segundas cadeias de cDNA que podem ser usadas na rea??o em cadeia da polimerase, um processo que amplifica as cadeias de DNA por meio de ciclos repetidos de replica??o de DNA e subsequente separa??o das duas cadeias. O cDNA geralmente cont?m iniciadores ou enzimas em uma extremidade da sequ?ncia de DNA, que servem como sinais para a liga??o de nucleot?deos e, portanto, a produ??o de filamentos de mRNA id?nticos ? sequ?ncia original.
Existem v?rios m?todos para amplifica??o de RNA, mas o m?todo que produz a maior quantidade de mRNA fiel ? c?pia original ? chamado de m?todo de troca de modelo. Este m?todo utiliza a enzima transcriptase reversa do v?rus da leucemia murina Moloney, que adiciona uma regi?o de iniciador ao final do cDNA da primeira fita ap?s a cria??o dessa fita a partir do modelo de RNA. Esta regi?o iniciadora ? adicionada tamb?m ? segunda cadeia de cDNA, a partir da qual s?o feitas c?pias de RNA amplificadas. Outra enzima, chamada promotora, pode ser ligada ? regi?o de iniciador na segunda fita do cDNA, o que aumenta drasticamente a quantidade de c?pias de RNA que s?o produzidas a partir dessa fita por meio da transcri??o.