Un anticorpo coniugato con isotiocianato di fluoresceina (FITC) è un marcatore molecolare fluorescente altamente specifico per una particolare proteina o per un anticorpo primario. Sono utilizzati per identificare le proteine nell’immunocitochimica, nei saggi di attività enzimatica e proteica, nella citometria a flusso e nel Western blotting. La maggior parte degli anticorpi FITC può essere acquistata tramite società specializzate in biologia molecolare o prodotta da singoli laboratori di ricerca.
FITC è un fluorocromo spesso coniugato o legato a un anticorpo per creare un marcatore fluorescente specifico. Quando esposti all’energia elettromagnetica a una lunghezza d’onda specifica, i fluorocromi sono sostanze chimiche che assorbiranno l’energia ed emetteranno un fotone a una specifica lunghezza d’onda. FITC assorbe energia a 495 nm ed emette un fotone a 521 nm. Ciascun fluorocromo ha un diverso intervallo di assorbimento ed emissione, consentendo il rilevamento sistematico di molti anticorpi legati al fluorocromo in un pezzo di tessuto o campione. Questo è simile all’etichettatura di parti diverse di una cella con colori diversi e quindi all’utilizzo di occhiali speciali per guardare un solo colore alla volta.
Gli anticorpi possono essere collegati o coniugati alla molecola FITC per produrre un anticorpo FITC. Questo anticorpo FITC può essere utilizzato per etichettare direttamente o indirettamente una proteina. Quando un anticorpo FITC marca direttamente una proteina, agisce come anticorpo primario o come anticorpo a diretto contatto con l’antigene. L’uso indiretto di un anticorpo FITC si verifica quando viene utilizzato come anticorpo secondario, legandosi specificamente a un anticorpo primario. Quando un anticorpo coniugato con FITC viene utilizzato direttamente, la procedura di etichettatura richiede meno tempo, ma l’etichettatura non è così forte. L’etichettatura indiretta richiede un ulteriore passaggio, ma il segnale o l’etichetta viene amplificato perché diversi anticorpi secondari con tag FITC possono attaccarsi a un singolo anticorpo primario.
Ci sono molti usi per l’anticorpo FITC nella biologia cellulare e molecolare. Questo tipo di anticorpo può essere utilizzato da solo o in combinazione con altri anticorpi monoclonali o policlonali per marcare proteine specifiche all’interno delle cellule in una tecnica nota come immunocitochimica. Gli anticorpi FITC possono essere utilizzati anche in tecniche quali saggi di attività enzimatica e proteica, citometria a flusso e Western blotting.
Gli anticorpi primari e secondari coniugati con FITC sono ampiamente disponibili presso molte aziende di biologia molecolare. È anche possibile che i laboratori preparino i propri anticorpi primari e quindi utilizzino un kit per coniugare loro FITC. Alcune aziende prenderanno anticorpi primari preparati in laboratorio e li coniugheranno al fluorocromo FITC per un laboratorio. Gli anticorpi secondari coniugati con FITC non sono in genere prodotti da singoli laboratori di ricerca e vengono solitamente acquistati da società specializzate nella produzione di anticorpi secondari.