La méthode ELISA est un test utilisé en immunologie et dans d’autres domaines scientifiques pour détecter les anticorps et les antigènes. ELISA signifie dosage immuno-enzymatique, qui fait référence au fait que des anticorps couplés à des enzymes sont utilisés pour déterminer les résultats du test. La méthode ELISA est utilisée en médecine pour détecter les anticorps dirigés contre les maladies comme mesure de diagnostic, et est une technique couramment utilisée dans la recherche immunologique et biochimique.
Le test ELISA a été développé dans les années 1960 et 1970 pour remplacer les tests immunologiques qui impliquaient l’utilisation d’anticorps et d’antigènes radioactifs. Les risques liés à l’utilisation de matières radioactives ont rendu le processus de test lourd et dangereux, et l’avènement de la méthode ELISA a résolu ces deux problèmes. Au lieu d’utiliser des matières radioactives pour déterminer les résultats d’un test, l’ELISA utilise des enzymes qui réagissent avec des anticorps pour former des produits colorés. Le développement de la couleur dans un test ELISA indique un résultat positif.
Il existe plusieurs types de tests ELISA. La méthode ELISA la plus couramment utilisée est appelée ELISA indirecte ; il s’agit d’un test d’anticorps utilisé pour déterminer si un certain type d’anticorps est présent dans un échantillon et à quelle concentration. En médecine diagnostique, ce test est utilisé pour détecter la présence d’anticorps dirigés contre des maladies infectieuses telles que le VIH, l’hépatite et autres. La présence d’anticorps contre ces maladies indique que la personne testée a été exposée aux agents infectieux. Typiquement, l’échantillon utilisé est du sang d’un patient.
Dans ce test, une protéine antigénique spécifique est utilisée pour revêtir une plaque de microtitrage. Cette petite plaque en plastique contient 96 petits puits et un seul test ELISA peut être effectué dans chaque puits. L’antigène utilisé pour un test donné dépend du type d’anticorps que le test essaie de détecter. Par exemple, si l’ELISA est utilisé pour un test VIH, l’antigène utilisé serait spécifique de ce virus.
Au fur et à mesure que le test progresse, de petites quantités de l’échantillon inconnu sont ajoutées à chaque puits de la plaque de microtitration, et la plaque est incubée pour laisser le temps aux anticorps de l’échantillon de se lier à l’antigène. Ensuite, un anticorps de détection secondaire est ajouté à chaque puits de la plaque. Si l’échantillon contient l’un des types d’anticorps recherchés, il se liera à l’anticorps de détection secondaire au cours de la période d’incubation suivante.
La clé de la méthode ELISA est que l’anticorps secondaire est marqué avec un type particulier d’enzyme. L’enzyme utilisée est capable de changer la couleur de l’échantillon à tester lorsqu’il réagit avec son substrat. Par conséquent, si un échantillon contient l’un des anticorps recherchés, l’ajout du substrat dans un puits le fera changer de couleur, en raison de la présence de l’anticorps secondaire et de son enzyme associée.
Il existe d’autres variantes de la méthode ELISA, notamment un test appelé ELISA sandwich. Ceci est utilisé pour détecter des antigènes dans un échantillon, plutôt que des anticorps. Dans ce test, la plaque de microtitration est recouverte d’un échantillon standardisé d’anticorps. Ensuite, l’échantillon de test d’antigène est ajouté, suivi de l’ajout de l’anticorps de détection secondaire et de son enzyme associée. Comme pour l’ELISA indirect, la formation d’un produit coloré indique un résultat positif.