Contrariamente a quanto si potrebbe pensare a prima vista, un anticorpo alla biotina non è una sostanza allevata contro la biotina. Piuttosto, un anticorpo alla biotina è un anticorpo che è stato coniugato alla biotina. La biotina si lega fortemente a un ligando – l’avidina – che può, a sua volta, essere coniugato a molecole rilevabili alla luce come i fluorofori. La biotina e l’avidina formano uno dei legami covalenti biologicamente più forti conosciuti, rendendo le unità di ligando/recettore coniugate con biotina e avidina particolarmente utili negli studi scientifici.
La biotina è una vitamina del complesso B, la vitamina B7. È una molecola così piccola che più molecole di biotina possono essere coniugate a un singolo anticorpo monoclonale o policlonale. Il fatto che la biotina sia anche solubile in acqua consente una maggiore versatilità nei sistemi tampone rispetto a se fosse insolubile. Per una maggiore specificità, la coniugazione dell’anticorpo monoclonale alla biotina è spesso raccomandata rispetto alla coniugazione dell’anticorpo policlonale. La molecola di biotina può essere direttamente legata all’anticorpo di interesse, oppure può essere collegata tramite una coda molecolare per consentire una maggiore libertà di movimento.
Il ligando della biotina avidina si trova nell’albume d’uovo. Può essere realizzato a buon mercato e facilmente isolato. Molteplici molecole di avidina si legheranno a ciascun recettore della biotina, amplificando un singolo segnale di rilevamento dell’anticorpo. Quando un anticorpo biotina aderisce a un antigene di interesse, uno sperimentatore può quindi esporre il complesso all’avidina coniugata ai fluorofori, rendendo il complesso rilevabile. Attraverso l’imaging fluorescente, l’anticorpo biotina e il ligando coniugato con avidina possono essere rilevati con la microscopia ottica e gli antigeni di interesse possono essere studiati in situ.
Sebbene la creazione e l’uso di un anticorpo biotina e di una molecola di avidina marcata in modo fluorescente sia una soluzione comune per il rilevamento dell’antigene, esistono alternative che fanno ancora uso del complesso biotina/avidina. Il legame della biotina a un ligando come una neurotossina può essere vantaggioso nel rilevare il posizionamento dei recettori neuronali interessati dalla neurotossina in questione. È anche possibile coniugare la biotina a una sequenza nucleotidica come l’acido ribonucleico messaggero (mRNA) per scoprire dove queste sequenze nucleotidiche vengono tradotte in proteine o per rilevare la regolazione dell’mRNA cellulare.
È possibile acquistare anticorpi policlonali o monoclonali biotinilati, sebbene la produzione di anticorpi biotinilati sia alla portata di molti sperimentatori. I protocolli possono essere trovati online che suggeriscono metodi di biotinilazione dell’anticorpo, sebbene i protocolli più facilmente seguiti colleghino direttamente la biotina a un anticorpo piuttosto che suggerire come intercalare un distanziatore molecolare. I distanziatori molecolari tra la biotina e il suo anticorpo associato consentono una maggiore distanza per esporre più molecole a siti di legame e questi anticorpi di biotina di solito vengono acquistati piuttosto che prodotti.